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Aucun épisode de Jojo's Bizarre Adventure n'est complet sans un antagoniste talentueux et dévoué tapi dans l'ombre.
L'ennemi le plus emblématique de Jojo est de loin le mégalomane Dio Brando, qui s'est ensuite baptisé DIO, dans Phantom Blood et Stardust Crusaders, où il a utilisé sa force vampirique et sa capacité à arrêter le temps pour soumettre tous ceux qu'il a rencontrés.
Après Dio, il y a eu les Pillar Men de Battle Tendency, une race d'êtres musclés et bien huilés dirigée par Kars, un homme au sang froid. Le tueur en série Yoshikage Kira, tout aussi calme et posé, a suivi le même chemin dans le quatrième épisode, Diamond is Unbreakable. Kars et Kira ont tous deux vu leurs thèmes musicaux, leurs déclarations, leur style et leurs poses devenir des classiques.
Diavolo, qui s'est enfermé dans sa chambre, a joué le rôle du méchant principal de Vento Aureo. Il sera succédé dans la série animée par Enrico Pucci pour Stone Ocean, et Funny Valentine pour Steel Ball Run.
Étant l'un des Hommes du Pilier, Kars était en fait assez vulnérable au pouvoir de l'Onde. Jusqu'à ce qu'il devienne la Forme de Vie Ultime, en absorbant les essences de tous les êtres vivants, y compris les utilisateurs de l'Onde, Kars pouvait exploiter l'Onde à des niveaux des centaines de fois plus puissants que ceux de Joseph.
Ses pouvoirs pouvaient désintégrer les tissus vivants d'un simple toucher, et provoquaient même une éruption volcanique lorsqu'ils étaient combinés avec la Pierre Rouge.
Léonard de Vinci a finalement semé les graines pour faire de Yoshikage Kira la plus grande menace de Morioh. En effet, Kira a vu les mains de la Mona Lisa lorsqu'elle était enfant, et a développé un complexe érotique qui s'est rapidement étendu à l'amour du "beau" en général. Il est également évident que Kira ne s'intéresse plus aux autres personnes ; son obsession se limite aux mains, et il tuerait volontiers pour n'emporter avec lui que ses parties du corps préférées.